|
|
|
|
|
|
| 泌尿生殖道支原体和衣原体检测的现状和存在问题 |
[摘 要]对泌尿生殖道支原体和衣原体检测的现状进行综述,着重分析目前支 原体和衣原体检测中存在的亟待解决的问题。
解脲脲原体(UU)、人型支原体(MH)、生殖支原体(MG)和沙眼衣原体(C T)都是寄生在泌尿生殖道的病原体,常引起泌尿生殖道疾患。支原体和衣原体感 染不但是非淋菌性尿道炎(NGU)的最主要病因(90%以上),且已成为发病率最高的 性传播疾病,已越来越受到重视。但由于技术局限,目前对其检测仍存在不少问题 亟待解决。笔者结合自己的工作经验,综述并分析泌尿生殖道支原体和衣原体检测 的现状和存在问题,以裨于试剂的改进和临床检测方法的提高。
1 检测现状 1.1 培养法 支原体可用人工合成培养基培养,由于不具有甾醇合成能力,培 养系统应添加含甾醇等长链不饱和脂肪醇丰富的物质,一般采用SP4培养基加马 血清。MG生长所需的营养成分复杂,生长极缓慢,一般需2周~3月。CT必须采用细 胞培养,一般用McCoy细胞系进行培养,但细胞培养需专业化技术、试剂和设备, 要求较高,周期也较长,目前临床一般不采用,仅在科研单位进行科研活动,或作 为新诊断试剂方法学评价的金标准。培养法不能快速检测支原体感染,一般UU和M H需2~3天才能出结果。不过随着实验水平提高,市面上已出现一些24 h可出结果 的试剂。但MG尚未实现24 h培养出结果,因此临床上不采用培养法检测MG,仅用于 科研活动。 目前临床培养法检测UU和MH多采用液体培养基,加样培养变色判断结果。理论 上这种变色也可能由于其它微生物代谢而发生,因此要求变色后过滤除菌,再接种 到固体培养基上观察菌落。若培养基选用适当抗生素,有效地抑制杂菌生长,单纯 液体培养基结果就有相当高的临床可信度。即使有个别变色是杂菌所致,标本病人 也有细菌性炎症,采用抗生素也不为过。 1.2 免疫法 采用此法检测的试剂目前临床较常用。一般为间接法(ELISA法或 金标法)检测抗体,比较而言金标法检测抗体的试剂用得更多;而用于检测支原体 抗原的试剂目前尚未商品化。此类试剂一般采用夹心法检测CT特异性脂多糖抗原( LPS),影响较大的有金标试剂和免疫荧光试剂。由于免疫反应的特异性和酶催化底 物反应的高效性或荧光信号的高敏性,故此类试剂理论上灵敏度和特异性都较高。 1.3 PCR法 此类衣原体试剂有定性和定量(多是PCR酶免试剂)两类,而支原 体试剂只有定性一类。PCR反应有较高的灵敏度,对实验条件、试剂以及操作人员 的要求都较高,操作不当易造成错误判断,并且PCR定性试剂一般没有药品批准文 号,临床上使用应慎重。定量试剂有药品批准文号,但面市不久,尚处于推广中。 科研单位使用PCR试剂一般用于鉴定血清型,而医疗单位使用PCR定量试剂多用于临 床疗效观察。 1.4 快速生化法 由于支原体生化酶反应速度和特异性都存在问题,目前尚无 检测支原体快速生化法试剂,但衣原体已有此方法学试剂。国内开发的生殖道CT生 化检测试剂即为此类,它是根据CT侵染上皮细胞后产生的独特的化学结构,配以生 化酶试剂与之反应,观察变色与否判断结果。临床观察资料表明,以细胞培养为金 标准,此试剂的灵敏度和特异性分别为87%以上和97%以上,加之价格较低,具有良 好的应用前景。
2 存在问题 2.1 由于支原体在人群中广泛存在,许多正常人也有低滴度抗体水平,单纯根 据一次抗体检测结果,很难判断标本病人是既往感染还是现症感染,再次测定支原 体抗体滴度增加时方可判为支原体阳性。为此要求检测支原体抗体的应为定量试剂 ,而目前国内间接法检测支原体抗体的试剂都是定性试剂,且有一定的市场占有率 ,这就说明了为什么许多病人检测抗体为阳性而培养则为阴性[1],也在一定程 度上影响了病情的确诊。国内有些科研单位正研制间接法检测支原体抗原的试剂[ | | |